濾光系統(tǒng)
酶標(biāo)儀簡(jiǎn)單的是用濾光方式來劃分。一般來說，可以分為濾光片型和光柵型兩大類。也有一些酶標(biāo)儀里面同時(shí)裝上了濾光片和光柵。但是濾片和光柵并不能同時(shí)完成同一個(gè)檢測(cè)，本質(zhì)上還只是把濾片和光柵放在了一起，并沒有使兩者糅合而產(chǎn)生新的技術(shù)突破。
光柵型濾光系統(tǒng)具有使用方便，可以進(jìn)行光譜掃描，靈活性等優(yōu)點(diǎn)。當(dāng)然，濾光片系統(tǒng)也有其顯著的優(yōu)勢(shì)，例如價(jià)格較為便宜，檢測(cè)靈敏度高，帶寬的可選擇性，可以進(jìn)行快速的濾光片切換，可配備有自動(dòng)加樣系統(tǒng)，在化學(xué)發(fā)光檢測(cè)中光線的透過率高。
目前，濾光片系統(tǒng)應(yīng)用更廣，因?yàn)樗梢宰寣?shí)驗(yàn)者完成更多的試驗(yàn)。
測(cè)定波長(zhǎng)
一般酶標(biāo)儀的測(cè)定波長(zhǎng)在400～750nm或800nm之間，完全可以滿足ELISA的顯色測(cè)定。目前國(guó)內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP)，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在過氧化氫溶液的存在下，經(jīng)HRP作用，分別氧化為2，2，—二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5．0左右時(shí)，DAB在450nm波長(zhǎng)處有吸收，當(dāng)pH值降為L(zhǎng) 0時(shí)，吸收波長(zhǎng)移至492 nm，同時(shí)摩爾消光系數(shù)變大，顯色加深，因而常用強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長(zhǎng)450nm處有消光系數(shù)，如果HRP量少，H：O：和TMB過量時(shí)，則形成藍(lán)色的陽離子根。降低pH，即可使藍(lán)色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此，450nm和492 nm兩個(gè)波長(zhǎng)是目前ELISA測(cè)定常用的。各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動(dòng)轉(zhuǎn)換的部件，可以同時(shí)安裝6～8片濾光片，所配備的濾光片均應(yīng)包括上述兩個(gè)波長(zhǎng)，有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大。除了這兩個(gè)基本濾光片外，考慮到雙波長(zhǎng)比色的需要，還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長(zhǎng)的濾光片，其他濾光片可根據(jù)自己的需要選擇。有時(shí)，有的實(shí)驗(yàn)室希望用酶標(biāo)儀作微量生化測(cè)定，故酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家對(duì)其生產(chǎn)的酶標(biāo)儀擴(kuò)展了紫外檢測(cè)功能，此時(shí)需要一個(gè)340 nm波長(zhǎng)濾光片。此時(shí)，酶標(biāo)儀的測(cè)定波長(zhǎng)范圍就成為340—750nm或800nm。
酶標(biāo)儀有單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)檢測(cè)功能。有時(shí)使用者不知在什么情況下使用單或雙波長(zhǎng)檢測(cè)。所謂的“單波長(zhǎng)”就是使用一種對(duì)顯色具吸收的波長(zhǎng)即450 nm或492 nm進(jìn)行比色測(cè)定；而“雙波長(zhǎng)”則除了用對(duì)顯色具吸收的波長(zhǎng)即450 nm或492 nm進(jìn)行比色測(cè)定外，同時(shí)用對(duì)特異顯色不敏感的波長(zhǎng)如630 nm進(jìn)行測(cè)定，酶標(biāo)儀打印出來的吸光度則為二者之差。630 nm波長(zhǎng)下得到的吸光度是非特異的，來自于板孔上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在ELISA比色測(cè)定中，使用雙波長(zhǎng)，且不必設(shè)空白孔。
測(cè)定的吸光度范圍
通常，酶標(biāo)儀的吸光度測(cè)定范圍在0～2.5之間即可以滿足ELISA的測(cè)定要求。早期的酶標(biāo)儀可測(cè)定的吸光度一般在0～2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達(dá)到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。因此，對(duì)于酶標(biāo)儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要要看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何。
光學(xué)系統(tǒng)
酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測(cè)，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測(cè)定通道外，有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道，每次測(cè)定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標(biāo)儀測(cè)定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳。測(cè)定的精密度與測(cè)定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
檢測(cè)速度
酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度是指其完成比色測(cè)定所需要的時(shí)間。檢測(cè)速度快，有利于提高檢測(cè)的精密度，即避免由于測(cè)定過程中，因測(cè)定時(shí)間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場(chǎng)上常見的酶標(biāo)儀檢測(cè)速度都非常快，通常在數(shù)秒鐘內(nèi)。
